1、抗原修复
其作用是利用化学试剂和热的作用暴露抗原，增加细胞和组织的通透性，以便抗体与抗原****限度的结合，增大强特异性染色和避免非特异性染色。
（1）、酶修复：常用的蛋白酶有胰蛋白酶、胃蛋白酶、胃蛋白酶以及链霉蛋白酶等；酶消化的时间和温度因各种抗原对消化的敏感性不同，应根据酶的活性通过预试验确定，消化的时间还与组织固定的时间有关，一般是陈旧固定组织所需时间长，以37℃为宜。消化时间短的组织可在室温中进行。消化处理时间过长会损伤组织，易使切片脱落，应使用切片粘附剂，消化时间尽量缩短。
（2）、热修复：
A.真空负压抗原修复法：
把切片放在0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0）内，真空负压干燥箱预先调至95℃，真空负压处理10分钟, 待修复液降至室温，PBS洗次。
  B.微波加热抗原修复法：
     把切片放在0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0）内，用微波炉加热10-20分钟(如液体减少,必须补加)，待修复液降至室温后，PBS洗次。
C.高压抗原修复法：
把切片放在0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0）内，放入高压锅中加热至沸腾。盖上压力阀至喷汽后持续2-3分钟。待修复液恢复至室温后，PBS洗次。
D.隔水热抗原修复法：
切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH0.6）中，加热至沸腾，持续30分钟。待抗原修复液恢复至室温后，PBS洗次。
E.电炉加热抗原修复法：
切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH0.6）中，于电炉上加热，，加热至沸腾，持续至20-30分钟。待抗原修复液降至室温后，PBS洗次。

2、合适的抗体稀释度
抗体的浓度是免疫染色的关键，如果抗体浓度过高，抗体分子过多于抗原决定簇，可导致抗体结合减少，产生阴性结果。此阴性结果并不一定是缺少抗原，而是由于抗体过量，这种现象类似于凝集的应中前带效应。因此，必须使用一系列稀释作“棋盘式效价滴定”，检测抗体的合适稀释度，以得到****强度的特异性染色和最弱的背景染色。