六胺银法(改良的Grocott,1955;Jones,1957) 试剂配制: (1)0.5%高碘酸水溶液:高碘酸0.5g,蒸馏水加至100ml (2)0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠0.5g,蒸馏水加至100ml (3)8%铬酸水溶液:铬酸8g,蒸馏水加至100ml (4)Gomori氏六胺银贮备液:5%硝酸银液5ml,3%六次甲基四胺100ml 将5%硝酸银液慢慢加入3%六次甲基四胺水溶液中,即形成乳白色沉淀,在摇动中沉淀溶解变清,澄清液盛于棕色小口砂塞瓶内,置于4℃冰箱保存待用。 (5)5%四硼酸钠水溶液:四硼酸钠5g,蒸链馏水加至100ml (6)六胺银工作液:Gomori氏六胺银贮备液10ml,蒸馏水25ml ,5%四硼酸钠水溶液2ml。先将四硼酸钠液加入蒸馏水中,然后加入Gomori氏六胺银贮备液,混合均匀后即可使用。 操作方法: 1、常规脱蜡至水。 2、0.5%高碘酸氧化15分钟。 3、流水冲洗5分钟。 4、8%铬酸氧化30分钟。 5、流水稍洗。 6、1%偏重亚硫酸钠液处理1分钟。 7、流水冲洗5分钟,再用蒸馏水洗。 8、切片放入预热60℃的六胺银工作液中,于60℃恒温箱内作用30-60分钟,直至见到切片在黄棕色的背景中见有黑色反应时,取出切片,蒸馏水洗后镜下检查,以肾小球毛细血管基底膜出现黑色的银沉淀为标准。如着色不够深,可用蒸馏水冲洗后再放回六胺银工作液中继续作用。 9、蒸馏水稍洗。 10、0.1%氯化金水溶液调色2分钟。 11、蒸馏水稍洗。 12、3%硫代硫酸钠液处理3分钟。 13、自来水冲洗5分钟。 14、用苏木素作对比染色。 15、各级酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。 结果:肾小球囊基底膜和肾毛细备管球基底膜呈黑色。霉菌、弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色。 |