一、酸水解-无色品红法(Feulgen and Rossenbeck,1924) 试剂配制: (1)0.2%亮绿水溶液:亮绿(light green)0.2g,蒸馏水加至100ml (2)无色品红液:碱性品红(basic fuchsin)1g,蒸馏水200ml,1N盐酸20ml,偏重亚硫酸钠1.5g,活性碳1.5g Schiff试剂配制: 1. 碱性品红1g,放入200毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。 2. 冷却至50℃时过滤,滤液中加入当量盐酸20毫升。 3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。 4. 加活性炭2 g,摇晃,过滤,以无色为****。棕色瓶,4℃冰箱保存。 (3)0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠0.5g,蒸馏水加至100ml (4)1N盐酸水溶液:浓盐酸(比重1.19)8.4ml,蒸馏水加至100ml 操作方法: 1、切片经二甲苯脱蜡至水。 2、室温中的1N盐酸稍洗。 3、放入预热至60℃的1N盐酸水解6-8分钟。 4、室温中的1N盐酸稍洗。 5、蒸馏水洗。 6、入无色品红液,于室温下置暗处作用30-60分钟。 7、不经水洗,直接滴入0.5%偏重亚硫酸钠水溶液洗二次,每次约1分钟。 8、流水洗5-10分钟。 9、0.2%亮绿水溶液复染数秒钟。 10、水洗。 11、常规脱水透明,中性树胶封固。 结果:脱氧核糖核酸呈紫红色,胞质和其他组织成份绿色。
(二)、甲基绿派洛宁法(Cook,1974) 试剂配制: (1)2%甲基绿水溶液:甲基绿(methyl green)1g,蒸馏水加至50ml 用三氯甲烷抽提:取2%甲基绿水溶液20ml,倾入洁净分液漏斗,加入三氯甲烷20ml,充分摇荡混合,使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。旋动分液漏斗下部的砂塞,慢慢地把有着色的三氯甲烷流去。如此反复更换三氯甲烷,直到三氯甲烷无紫红色为止,即可得到得纯的甲基绿溶液。 (2)5%派洛宁水溶液:派洛宁G(pyronine G)1g,蒸馏水加至20ml (3)0.2M醋酸盐缓冲液(pH 4.8):0.2M醋酸液41ml,0.2M醋酸钠液59ml (4)甲基绿派洛宁染液:2%甲基绿水溶液(经抽提)5ml,5%派洛宁水溶液1ml,蒸馏水12ml,0.2M醋酸盐缓冲液(pH 4.8)18ml 操作方法: 1、新鲜组织固定于Carnoy氏液(4℃)3-6小时,经95%酒精和无水酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。 2、切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水 3、置入甲基绿派洛宁染液于室温染30-60分钟。 4、取出切片,不经水洗,用滤纸吸干多余染液。 5、用丙酮迅速分化。 6、转入丙酮二甲苯(1:1)稍洗。 7、二甲苯透明2-3次。 8、中性树胶封固。 结果:存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色,胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。 |