HER2显色原位杂交法
一、预处理
1、 脱蜡至水
   二甲苯    5分钟，2 次
   100%酒精 1分钟，2 次
   95%酒精  1分钟，1 次
   85%酒精  1分钟，1 次
   双蒸水    1分钟 ，3次
2、加热预处理
   热预处理液（试剂盒内带）加热至98-100℃时，放入切片，15-20分钟。
   双蒸水洗    1分钟，3次
3、胃蛋白酶消化
   将胃蛋白酶先放入37℃温箱预热，然后滴加至组织上。
室温， 5-30分钟  （其间用显微镜观察，如果出现细胞核向外突出，有荷包蛋样改变即可停止，此步较为关键，消化不足和消化过了，都会导致假阴性或只有少量阳性）
     双蒸水 1分钟，3次
4、酒精脱水
   85%酒精 1分钟，2 次
   95%酒精 1分钟，1 次
   100%酒精 1分钟，1 次
室温或37℃温箱干燥5分钟
四、变性和杂交
1、 滴加探针：在组织中央滴加探针（约法10-15μl），将盖玻片轻轻的盖在组织上，避免产生气泡。
2、将玻片放在原位杂交仪或原位PCR仪上，如没有也可平放于铝制饭盒等底平的器皿底部。
3、95℃变性5分钟，如没有原位杂交仪或原位PCR仪，可将水烧开，拔去插座，放入铝盒，将水温控制在95℃-98℃，6分钟；也可以放入95℃烤箱内，5分钟。
4、快速冷却至37℃（如没有原位杂交仪或原位PCR仪，可将铝盒移至冰水中冷却），并将玻片移至湿盒内，37℃温箱孵育12小时。
5、杂交后，小心除去玻片，放入CAS-BlockTM阻断液或TBS/Tween20（0.025%）液内洗1分钟，然后放入75℃的CAS-BlockTM阻断液洗5分钟，TBS/Tween20（0.025%）液洗也可达到同样的效果。
6、双蒸水 1分钟，3次
五、免疫显色
   1、滴加3%甲醇双氧水液5-10分钟（室温）。
   2、TBS/Tween20（0.025%）液1分钟， 3次。
   3、滴加封闭液5-10分钟（室温）。
   4、擦去多余封闭液，滴加小鼠抗地高辛抗体室温30分钟。
   5、TBS/Tween20（0.025%）液1分钟， 3次。
   6、滴加HRP-抗鼠抗体室温30分钟。
   7、TBS/Tween20（0.025%）液1分钟， 3次。
   8、DAB显色 5-30分钟（镜下控制，以组织芯片同时达到预期强度为标准）。
   9、自来水洗。
六、衬染和封片
   1、苏木素浅染10-30秒
   2、水洗，蓝化，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。